水傳病原微生物PCR-納米金顯色快速檢測(cè)方法
更新時(shí)間：2014-07-31 14:15
來源：環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)
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摘要：水傳病原微生物是腹瀉等腸胃疾病發(fā)病的主要原因，而發(fā)展快速、有效的檢測(cè)方法對(duì)于控制和減少該類微生物的傳播風(fēng)險(xiǎn)十分重要.因此，本文研究了PCR反應(yīng)結(jié)合不修飾的納米金顆粒（Gold nano-particles， AuNPs）顯色檢測(cè)方法的最佳鹽濃度、探針含量、PCR反應(yīng)條件等，并從納米金制備、病原菌種類、檢測(cè)特異性等方面進(jìn)行考核，確定了最優(yōu)檢測(cè)條件為：10 μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物混合20 pmol探針，95 ℃反應(yīng)5 min，55.5 ℃反應(yīng)3 min后，40 ℃雜交10 min；此時(shí)，先后加入90 μL實(shí)驗(yàn)用納米金和一定濃度的PBS溶液，室溫觀察顏色變化.結(jié)果發(fā)現(xiàn)，納米金溶液由紅色變?yōu)樽仙蚪跓o色為陽(yáng)性結(jié)果，對(duì)應(yīng)的吸光度值遷移出530 nm，以此可達(dá)到快速檢測(cè)病原微生物的目的.
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